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转基因棉花MON531~(R7569)中截短cry1Ac基因表达的初步分析

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转基因棉花MON531~(R7569)中截短cry1Ac基因表达的初步分析
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-14页
英文缩略表第14-15页
第一章 引言第15-25页
  1.1 转基因作物发展现状第15-16页
    1.1.1 全球转基因作物发展现状第15页
    1.1.2 我国转基因棉花发展现状第15-16页
  1.2 转基因生物监管及标识制度第16-17页
  1.3 转基因作物检测技术发展第17-20页
    1.3.1 转基因作物外源核酸的PCR检测技术第17-19页
      1.3.1.1 转基因外源核酸PCR检测技术的发展第17-18页
      1.3.1.2 常用的转基因PCR检测技术第18-19页
    1.3.2 转基因作物外源蛋白检测技术及其他检测技术第19-20页
  1.4 转基因整合特点第20-21页
  1.5 转基因植物分子特征第21页
  1.6 转基因作物中杀虫蛋白的表达及其影响因素第21-23页
    1.6.1 转基因棉花杀虫基因表达的研究第21-22页
    1.6.2 其他转基因作物中抗虫基因的表达研究第22页
    1.6.3 影响转基因作物外源蛋白表达的因素第22-23页
  1.7 研究背景、内容及意义第23-25页
    1.7.1 研究背景第23-24页
    1.7.2 研究内容第24页
    1.7.3 研究意义第24-25页
第二章 MON531~(R7569)插入结构验证及检测方法的建立第25-36页
  2.1 实验试剂及仪器第25-26页
  2.2 样品制备第26-27页
    2.2.1 材料来源第26页
    2.2.2 基因组DNA提取第26-27页
  2.3 引物设计第27-29页
    2.3.1 结构验证引物设计第27页
    2.3.2 外源整合结构验证引物设计第27-28页
    2.3.3 定量检测方法的引物设计第28-29页
  2.4 PCR扩增第29-30页
    2.4.1 MON531~(R7569)的旁侧序列及cry1Ac基因的扩增第29页
    2.4.2 MON531~(R7569)的外源插入结构的扩增第29页
    2.4.3 定量PCR第29-30页
      2.4.3.1 定量标准曲线的建立第29页
      2.4.3.2 定量PCR扩增第29页
      2.4.3.3 MON531~(R7569)市场样品的定量检测第29-30页
  2.5 结果与分析第30-34页
    2.5.1 MON531~(R7569)中旁侧序列和cry1Ac基因验证结果第30-31页
    2.5.2 MON531~(R7569)外源插入结构的验证第31-32页
    2.5.3 定量检测方法的建立及澳门美高梅真人娱乐官网第32-34页
      2.5.3.1 定量PCR方法的建立第32-33页
      2.5.3.2 市场样品的定量检测第33-34页
  2.6 讨论与分析第34-36页
第三章 MON531~(R7569)中cry1Ac基因的转录分析第36-47页
  3.1 主要试剂及仪器第36页
  3.2 样品制备及RNA提取第36-37页
    3.2.1 材料来源第36页
    3.2.2 总RNA提取第36-37页
  3.3 RACE分析第37-40页
    3.3.1 RACE引物设计第37-38页
    3.3.2 RACEReadycDNA的合成第38页
    3.3.3 巢式PCR扩增第38页
    3.3.4 PCR产物克隆测序第38-40页
      3.3.4.1 产物回收第38-39页
      3.3.4.2 连接载体并转化感受态细胞第39页
      3.3.4.3 配置LB液体和固态平板培养基第39页
      3.3.4.4 涂板及扩繁第39页
      3.3.4.5 菌液PCR鉴定及测序第39-40页
  3.4 RT-PCR第40-41页
    3.4.1 RT-PCR引物设计第40页
    3.4.2 cDNA的合成第40页
    3.4.3 标准曲线的建立第40-41页
    3.4.4 RT-PCR第41页
    3.4.5 RT-PCR数据处理第41页
  3.5 结果分析第41-45页
    3.5.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因的转录本分析第41-43页
      3.5.1.1 巢式PCR第41页
      3.5.1.2 PCR产物克隆测序第41-42页
      3.5.1.3 cry1Ac基因的转录本分析第42-43页
    3.5.2 MON531~(R7569)的cry1Ac基因转录分析第43-45页
      3.5.2.1 cry1Ac基因的标准曲线第43-45页
      3.5.2.2 转录水平分析第45页
  3.6 结论与讨论第45-47页
第四章 MON531~(R7569)中Cry1Ac蛋白的表达分析第47-51页
  4.1 实验试剂与仪器第47页
  4.2 样品制备第47-48页
    4.2.1 材料来源第47页
    4.2.2 植物总蛋白的提取第47-48页
  4.3 Cry1Ac蛋白含量测定第48页
  4.4 数据数据分析第48页
  4.5 结果分析第48-49页
  4.6 结论与讨论第49-51页
第五章 转基因棉花MON531~(R7569)室内抗虫性测定第51-56页
  5.1 实验试剂及仪器第51页
  5.2 材料准备第51页
    5.2.1 棉花样品来源第51页
    5.2.2 供试虫源第51页
  5.3 生物测定第51页
  5.4 杀虫蛋白含量测定第51-52页
  5.5 数据处理第52页
  5.6 结果分析第52-54页
    5.6.1 棉铃虫取食棉花叶片情况第52页
    5.6.2 转基因抗虫棉抗虫性测定第52-53页
    5.6.3 Cry1Ac杀虫蛋白含量测定第53-54页
  5.7 结论与讨论第54-56页
第六章 cry1Ac基因序列的甲基化分析第56-63页
  6.1 主要试剂及仪器第56页
  6.2 样品制备第56-57页
    6.2.1 材料来源第56页
    6.2.2 基因组DNA提取第56-57页
  6.3 引物设计第57页
    6.3.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因MSRE-qPCR引物设计第57页
    6.3.2 亚硫酸盐测序法的PCR引物设计第57页
  6.4 cry1Ac基因的MSRE-qPCR第57-58页
    6.4.1 甲基化敏感的限制性内切酶的选择第57-58页
    6.4.2 酶切基因组DNA第58页
    6.4.3 RT-PCR第58页
  6.5 亚硫酸盐测序分析甲基化区域第58-59页
    6.5.1 基因组DNA的亚硫酸盐处理第58页
    6.5.2 PCR扩增第58页
    6.5.3 产物克隆测序第58-59页
  6.6 数据处理第59页
    6.6.1 cry1Ac基因甲基化区域定量分析第59页
  6.7 结果分析第59-61页
    6.7.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因的甲基化测定第59页
    6.7.2 cry1Ac基因序列甲基化区域不同时期的监测第59-60页
    6.7.3 cry1Ac基因甲基化序列区域亚硫酸盐测序第60-61页
  6.8 结论与讨论第61-63页
第七章 全文结论第63-65页
参考文献第65-76页
附录第76-77页
致谢第77-78页
作者简历第78页

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