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用RNA测序技术研究黑灵芝多糖对T淋巴细胞免疫调节活性的影响及其作用机制

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用RNA测序技术研究黑灵芝多糖对T淋巴细胞免疫调节活性的影响及其作用机制
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
缩略词表第12-14页
第1章 绪论第14-27页
  1.1 灵芝多糖的免疫调节作用及机制第14-17页
    1.1.1 激活巨噬细胞第14-15页
    1.1.2 激活NK细胞第15页
    1.1.3 激活树突状细胞第15-16页
    1.1.4 激活B淋巴细胞第16-17页
    1.1.5 激活T淋巴细胞第17页
  1.2 T细胞功能性亚群的分化及功能第17-23页
    1.2.1 Th1/Th2细胞的分化第18-19页
    1.2.2 Th17/Treg细胞的分化第19-22页
    1.2.3 Th1/Th2细胞与疾病之间的关系第22-23页
    1.2.4 Th17/Treg细胞与疾病之间的关系第23页
  1.3 高通量测序技术第23-25页
    1.3.1 高通量测序技术的发展与澳门美高梅真人娱乐官网第23-24页
    1.3.2 RNA测序技术第24页
    1.3.3 RNA测序技术在国内外研究的现状第24-25页
  1.4 本研究的主要内容及其目的意义第25-27页
    1.4.1 主要内容第25页
    1.4.2 研究的目的意义第25-27页
第2章 黑灵芝多糖对T淋巴细胞的免疫调节活性的影响第27-46页
  2.1 引言第27-28页
  2.2 实验材料与仪器第28-29页
    2.2.1 实验材料第28-29页
    2.2.2 实验仪器第29页
  2.3 试验方法第29-34页
    2.3.1 纯化T淋巴细胞第29-30页
    2.3.2 分离纯化CD4~+T淋巴细胞第30页
    2.3.3 CCK-8法检测细胞增殖第30页
    2.3.4 ELISA法检测细胞因子第30页
    2.3.5 体外诱导Th17细胞生成第30页
    2.3.6 流式细胞术检测黑灵芝多糖对体外诱导Th17细胞分化的影响第30-31页
    2.3.7 体外诱导Treg细胞生成第31页
    2.3.8 流式细胞术检测黑灵芝多糖对体外诱导Treg细胞分化的影响第31页
    2.3.9 建立免疫低下小鼠模型第31页
    2.3.10 分离脾淋巴细胞第31-32页
    2.3.11 流式细胞仪检测Th17(CD4~+IL-17A~+)细胞亚群第32页
    2.3.12 流式细胞仪检测Treg(CD4~+CD25~+)细胞亚群第32页
    2.3.13 ELISA法检测Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1水平第32页
    2.3.14 RT-qPCR法检测Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1mRNA第32-33页
    2.3.15 RT-qPCR法检测Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3和Foxp3mRNA表达第33-34页
    2.3.16 Westernblot法检测Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3、p-STAT3和Foxp3蛋白表达水平第34页
    2.3.17 数据处理第34页
  2.4 结果与分析第34-42页
    2.4.1 PSG-1对纯化T淋巴细胞增殖能力的影响第34-35页
    2.4.2 PSG-1对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响第35-36页
    2.4.3 PSG-1对体外诱导Th17和Treg细胞分化的影响第36-37页
    2.4.4 PSG-1对脾脏组织细胞因子水平的影响第37页
    2.4.5 PSG-1对Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1mRNA表达水平的影响第37-38页
    2.4.6 PSG-1对Th17/Treg转录因子STAT3、RORγt和Foxp3mRNA表达水平的影响第38-39页
    2.4.7 PSG-1对Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3、p-STAT3和Foxp3蛋白表达水平的影响第39-40页
    2.4.8 PSG-1对免疫抑制小鼠的Th17(CD4~+IL-17A~+)和Treg(CD4~+CD25~+)细胞亚群的影响第40-42页
  2.5 讨论第42-45页
  2.6 本章小结第45-46页
第3章 用RNA测序技术筛选黑灵芝多糖刺激T淋巴细胞的差异表达基因第46-72页
  3.1 引言第46-47页
  3.2 实验材料与仪器第47-48页
    3.2.1 实验材料第47页
    3.2.2 实验仪器与设备第47-48页
  3.3 实验方法第48-50页
    3.3.1 RNA提取第48页
    3.3.2 总RNA质量和完整性检测第48页
    3.3.3 文库的准备及测序第48-49页
    3.3.4 RT-qPCR第49-50页
  3.4 数据处理第50-53页
    3.4.1 原始数据的整理、过滤及质量评估第51-52页
    3.4.2 与参考序列对比第52页
    3.4.3 对比结果质控分析第52页
    3.4.4 基因表达量第52-53页
    3.4.5 表达量的测序质量评估第53页
    3.4.6 Gene Ontology富集分析第53页
    3.4.7 KEGG富集分析第53页
  3.5 结果与讨论第53-70页
    3.5.1 样本总RNA质量评估第53-55页
    3.5.2 原始数据整理、过滤及质量评估第55-56页
    3.5.3 测序数据质控分析第56-58页
    3.5.4 比对分析第58-62页
    3.5.5 比对结果质控分析第62-64页
    3.5.6 表达量的测序质量评估第64-67页
    3.5.7 差异基因的筛选第67页
    3.5.8 GeneOntology富集分析第67-68页
    3.5.9 KEGG富集分析第68-69页
    3.5.10 RT-qPCR验证RNA测序结果的可靠性第69-70页
  3.6 讨论第70-71页
  3.7 本章小结第71-72页
第4章 基于RNA测序技术研究黑灵芝多糖对T淋巴细胞免疫调节活性作用机制第72-84页
  4.1 引言第72-73页
  4.2 实验材料与仪器第73页
    4.2.1 实验材料第73页
    4.2.2 主要仪器设备第73页
  4.3 试验方法第73-75页
    4.3.1 CCK-8法检测细胞增殖第73-74页
    4.3.2 ELISA法检测细胞因子第74页
    4.3.3 细胞内Ca~(2+)浓度测定第74页
    4.3.4 钙调磷酸酶(CaN)含量的测定第74页
    4.3.5 Westernblot检测蛋白第74页
    4.3.6 数据处理第74-75页
  4.4 结果与分析第75-81页
    4.4.1 PSG-1对Ca~(2+)/CaN的影响第75-77页
    4.4.2 钙离子通路抑制剂对T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响第77-78页
    4.4.3 PSG-1对促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响第78-80页
    4.4.4 MAPK三个亚基的抑制剂对T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响第80-81页
  4.5 讨论第81-83页
  4.6 本章小结第83-84页
第5章 结论与展望第84-86页
  5.1 本研究主要结论第84-85页
  5.2 本研究的主要创新点第85页
  5.3 进一步的研究方向第85-86页
致谢第86-87页
参考文献第87-99页
附录第99-119页
附录A第99-103页
附录B第103-119页
攻读学位期间的研究成果第119页

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