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当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞损伤的作用及相关机制研究

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当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞损伤的作用及相关机制研究
论文目录
 
摘要第1-12页
Abstract第12-17页
英文缩略词(Abbreviation)第17-18页
引言第18-21页
第一部分 不同浓度阿霉素对IMCD3细胞损伤的研究第21-33页
1.实验材料第21-22页
  1.1 细胞来源第21页
  1.2 药物与试剂第21页
  1.3 主要仪器第21-22页
2.实验主要试剂配制第22-23页
  2.1 PBS缓冲液的配制第22页
  2.2 完全培养基的配制第22页
  2.3 阿霉素的配制第22页
  2.4 MTT液的配制第22页
  2.5 细胞冻存液的配制第22页
  2.6 12%分离胶的配制(两块板)第22-23页
  2.7 5%浓缩胶的配制(两块板)第23页
  2.8 10×电泳缓冲液的配制第23页
  2.9 转移缓冲液的配制第23页
  2.10 封闭缓冲液的配制第23页
  2.11 一抗配制第23页
  2.12 二抗配制第23页
3 IMCD3细胞培养第23-24页
  3.1 细胞复苏第23-24页
  3.2 细胞换液培养第24页
  3.3 细胞传代第24页
  3.4 细胞冻存第24页
4.MTT法筛选不同阿霉素浓度对IMCD3细胞的生长增殖的影响第24-25页
5 Annexin V/PI染色检测IMCD3细胞凋亡第25-26页
6 Western blot检测不同浓度阿霉素诱导的IMCD3细胞AQP2蛋白的表达第26-28页
  6.1 蛋白样品的制备第26页
  6.2 灌胶和上样第26-27页
  6.3 电泳第27页
  6.4 转膜第27页
  6.5 一抗、二抗孵育第27页
  6.6 显影第27-28页
  6.7 结果分析第28页
7 学处理第28页
8 实验结果第28-31页
  8.1 形态学观察不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞生长状态第28页
  8.2 MTT法检测不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞的毒性作用第28-29页
  8.3 不同浓度阿霉素对IMCD3细胞凋亡的影响第29-31页
  8.4 不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞AQP2蛋白表达的影响第31页
9 讨论第31-33页
第二部分 不同浓度当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白表达的作用第33-41页
1 实验材料及仪器第33页
  1.1 细胞株第33页
  1.2 主要试剂第33页
  1.3 主要仪器第33页
2.实验方法第33-36页
  2.1 细胞培养第33页
  2.2 当归芍药散提取液的制备第33页
  2.3 不同浓度当归芍药散对阿霉素损伤的IMCD3细胞生长增殖的影响(MTT法)第33-34页
  2.4 Western blot检测不同浓度当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白表达的影响第34-36页
3.学处理第36页
4.实验结果第36-38页
  4.1 MTT法实验结果第36页
  4.2 Western blot法检测AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达第36-38页
5.讨论第38-41页
第三部分 当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞的作用机制研究第41-56页
1 实验材料及仪器第41-43页
  1.1 细胞株第41页
  1.2 主要试剂第41页
  1.3 实验试剂配制第41-43页
  1.4 主要仪器第43页
2 实验方法第43-48页
  2.1 细胞培养第43-44页
  2.2 ELISA法检测当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞上清液cAMP水平的变化第44-45页
  2.3 当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞Na~+-K~+-ATP酶活性检测第45-47页
    2.3.1 样本的前处理第45-46页
    2.3.2 酶促反应操作步骤第46-47页
  2.4 Western blot检测PKA,CREB,AQP2,Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达第47-48页
    2.4.1 蛋白样品的制备第47页
    2.4.2 灌胶和上样第47页
    2.4.3 电泳第47页
    2.4.4 转膜第47-48页
    2.4.5 一抗、二抗孵育第48页
    2.4.6 显影第48页
    2.4.7 结果分析第48页
3 学处理第48-49页
4 实验结果第49-53页
  4.1 ELISA法检测当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞cAMP水平的变化第49页
  4.2 当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影响第49-50页
  4.3 Western blot法检测PKA,CREB,AQP2的表达第50-52页
  4.4 Western blot法检测Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达第52-53页
5.讨论第53-56页
总结第56-57页
参考文献第57-62页
综述第62-75页
参考文献第69-75页
个人简历第75-76页
致谢第76页

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